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    MTT

    MTT(四唑蓝)比色法是是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验等研究。 实验方法:        1. 收集

    1. 详细信息

    MTT(四唑蓝)比色法是是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。MTT法广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验等研究。

     

    实验方法:

            1. 收集对数生长期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入50μl铺板使待测细胞调密度 5000- 7500细胞/ 孔。

            2.  5%CO237℃孵育过夜,倒去培养液,加入浓度梯度的药物。每个药物设9个浓度梯度(30μmol/L,10μmol/L,3.33μmol/L,1.11μmol/L,0.37μmol/L,0.123μmol/L, 0.041μmol/L, 0.0137μmol/L, 0μmol/L),每孔50μl,每个浓度设2个重复,同时设DMSO和阳性药物(Taxol/Gemcitabine)对照组。

           3.  5%CO237℃孵育72小时。

           4. 倒掉含药培养基,每孔加入100μl 用无血清培养基配制的终浓度1mg/ml MTT 溶液,继续培养4h

           5.  每孔加入溶解液25%SDS (Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸钠)+50%DMF 100μl37℃孵育过夜。

           6. synergy 4多功能读板机于OD570nm读取各孔的吸光值。

    统计学分析

             1.分析软件     ExcelGraphPad Prism 5

            2.  数据分析    

     1)计数资料以均值±标准差表示,结果采用单因素方差分析(ANOVA)。

          2)各种样品的IC50曲线用GraphPad Prism 5软件进行分析生成。

                样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比为:

      (样品孔OD-空白孔OD均值)/(阴性对照孔OD-空白孔OD均值)*100%

      3)样品对肿瘤细胞生长的抑制百分比进行非线性回归分析,按以下方程进行拟合,得到样品的浓度-效应依赖性曲线。

    Y = 1/(1 + 10(log IC50X) × HillSlope)

                        其中IC 50为抑制肿瘤生长50%的样品浓度。



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